Теория
Ранее считалось, что наиболее мощными прогностическими факторами при ИМ являются фракция выброса и конечный систолический объем левого желудочка (ЛЖ) [5–7]. Согласно современным представлениям глубина и площадь некроза миокарда при ИМ определяют функциональную
восстановительную способность миокарда и являются более сильными предикторами неблагоприятных сердечно-сосудистых событий, чем систолическая активность ЛЖ [8, 9]. (см)
Проведение исследования (моделирования острого инфаркта миокарда in vivo )
Создавали региональную ишемию (40 минут, окклюзией коронарной артерии)
В конце реперфузии сердце окрашивали введением в нижнюю вену 2 мл раствора синьки Эванса. Повторно ограничивали кровоток в коронарной артерии (перетягивали лигатурой зону риска); С вырезами помещали в стакан с физраствором, отрезали правую часть сердца (желудочек, предсердия и оба ушка). Левый желудочек с перегородкой подсушивали на салфетке; замораживали при температуре -18 градусов С.; подписвали номер опыта.
Сердце сохраняли в морозильнике 1-3 сутки до следующего этапа работы с ним.
Окраска срезов сердца и забор сердца
Подготовка срезов сердца.
- Включить компьютер, лампу, весы. Приготовить инструменты.
- Запустить программу Epson Scan на рабочем столе. Параметры: «Профессиональный режим», «Установка 16».
- Наливаем физиологический раствор (0,9% NaCl) в стакан, нагреваем на мешалке с подогревом до 37°С (ок. 60°С на приборе), контролируя температуру термометром, затем отставляем под лампу.
- Готовим в бюксе 1% раствор 2,3,5-трифенилтетразолий хлорида (50 мг на 5 мл фосфатного буфера), нагреваем на мешалке с подогревом до 37°С, контролируя температуру термометром, затем отставляем под лампу.
- Достаем из морозильной камеры сердце. Быстро режем лезвием (например, Rapira) на поперечные срезы толщиной около 2 мм (4–5 срезов). Помещаем в физ. р-р для окончательной разморозки и отмывки от р-ра Эванса.
- Вынимаем срезы из физ. р-ра, подсушиваем салфеткой на фильтровальной бумаге и помещаем в бюкс с р-ром ТФТ и инкубируем 10 мин (под лампой).
- Вынимаем срезы из бюкса, подсушиваем салфеткой на фильтровальной бумаге и помещаем на 1 мин в 10% раствор формалина.
- Вынимаем срезы из формалина, подсушиваем салфеткой на фильтровальной бумаге и раскладываем на смотровом стекле слева направо от основания к верхушке ЛЖ, накрываем покровным стеклом, надеваем на конструкцию зажимы строго на ножки.
- В программеEpson Scan нажимаем «Просмтр», после предварительного сканирования выделяем требуемую зону, Нажимаем «Сканировать», вводим название файла в строку «Префикс» (сохраняется в папку серии в «Мои рисунки»), проверяем качество изображения.
- Переворачиваем конструкцию на 180° строго вдоль большой оси стекла, повторяем п.9.
- Конструкцию извлекаем, аккуратно открываем так, чтобы срезы остались на одном из стекол и взвешиваем по порядку строго от основания к верхушке, вес записываем.
ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ и определение РАЗМЕРОВ ИНФАРКТА МИОКАРДА
- Включить компьютер.
- Поменять разрешение монитора ViewSonic с рекомендованного на 1280×720.
- Открыть папку Размеры ИМ → ОБРАБОТКА. Запустить программу IMAGECAL.
- В открывшемся окне выбираем папку с сохраненными изображениями срезов. Например, DATA → Galanin → R_#_1 ( _1 – первое сканирование: срезы слева направо от основания к верхушке; _2 – второе сканирование: срезы слева направо от верхушки к основанию).
- В развернувшемся окне начинаем обсчет зон. Обводим крестообразным курсором требуемую зону, периодически ставя точки левой кнопкой мыши. По окончании обведения нажимаем правую кнопку мыши для вывода на экран площади зоны в пикселях. Данные записываем в Таблицы обработки. Повторяем для каждой зоны.
- Необходимо занести : общую площадь среза ЛЖ, площадь зоны риска (ЗР) ЛЖ (все, кроме синей интактной зоны) и площадь зоны инфаркта миокарда (ИМ) по обеим сторонам срезов (изображения _1 и _2).
- Открываем файл MS Excel Расчет зон. Копируем столбцы из Таблиц обработки в данный шаблон. Заносим вручную вес среза. Получаем расчетные данные по ЗР/ЛЖ и ИМ/ЗР в %.
- По окончании обработки серии заносим полученные результаты в одноименный файл MS Excel в папке RESULTS.